Вирус болезни Ньюкасла

Вирус болезни Ньюкасла (ВБН) – парамиксовирус, который вызывает болезнь у целого ряда птиц (однако, стоит заметить, что, в основном, у куриц) (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Nelson NJ, 1999; Emergency Preparedness Information eXchange, 2006; Seal BS, King DJ, Sellers HS, 2000). Это заболевание, чаще с летальным исходом, вызывает раздражение дыхательных путей, а также воспаление мозга или желудочно-кишечного тракта (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Nelson NJ, 1999; Emergency Preparedness Information eXchange, 2006; Alexander DJ, Allan WH, 1974; Hanson RP, 1974). ВБН может также поражать и людей, но для них, в основном, он не очень опасен, вызывая только легкие симптомы простуды, а также конъюктивит или ларингит (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Emergency Preparedness Information eXchange, 2006; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Kenney S, Pagano JS, 1994; Kirn DH, McCormick F, 1996; Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al., 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998). Осознание того, что ВБН может копироваться в 10000 раз лучше в человеческих клетках, чем многие нормальные человеческие клетки (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996; Tzadok-David Y, Metzkin-Eizenberg M, Zakay-Rones Z., 1995; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994), пробудило огромный интерес к этому вирусу как к потенциальному противораковому агенту (Nelson NJ, 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Kenney S, Pagano JS, 1994; Kirn DH, McCormick F, 1996; Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al., 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Cassel WA, Garrett RE, 1965; Reichard KW, Lorence RM, Katubig BB, et al., 1993; Nemunaitis J, 1999; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001). Хотя ВБН был объявлен лекарственным средством, так как он был признан нетоксичным (безвредным), этот вирус был тщательно исследован медицинским сообществом (Moss RW:, 1996).

Генетический материал вируса содержится скорее в РНК, ген в ДНК (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Seal BS, King DJ, Sellers HS, 2000; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000; Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999). Как и у других вирусов, репликационный цикл ВБН происходит внутри зараженных клеток, которые также известны как клетки «хозяина? (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998). В течение репликации новые вирусные белки и копии генматериала ВБН (т.е. геном) образуются в хозяйских клетках цитоплазмы. ВБН также обернутый вирус, что означает, что потомки частиц вируса освобождаются из зараженных клеток, перерастая их (Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000; Eaton MD, Heller JA, Scala AR, 1973). Во время этого процесса, единичная (одиночная) копия ВБН генома обертывается во внешнюю оболочку (т.н. конверт), которая состоит из маленькой части хозяйской клеточной плазматической мембраны. В общем, внешняя оболочка ВБН содержит только вирусные белки, которые были специально включены (помещены) в клетки хозяина плазматической мембраны (Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Eaton MD, Heller JA, Scala AR, 1973): однако, некоторые клеточные белки хозяина также могут там оказаться (Webb HE, Smith CE, 1970; Beverley PC, Lowenthal RM, Tyrrell DA, 1973). Два специфических вирусных белка, гемагглютинин-нейроминидаза и белок F (белок синтеза) – основные белки ВБН, найденные во внешней оболочке изолированных вирусных частиц (Seal BS, King DJ, Sellers HS, 2000; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000). Существует множество различных штаммов ВБН, они были классифицированы как литические (лизирующие клетки) и нелитические для человеческих клеток. И литические и нелитические штаммы появляются, чтобы репродуцироваться гораздо более эффективно в человеческих раковых клетках, чем в других здоровых клетках (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996; Tzadok-David Y, Metzkin-Eizenberg M, Zakay-Rones Z, 1995; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Cassel WA, Garrett RE, 1965), и вирусы обоих штаммов были изучены как потенциальные противораковые агенты (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001). Одно существенное различие между штаммами заключается в том, что литические штаммы оставляют зараженное потомство в человеческих клетках, в то время как нелитические нет (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1987; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000; Ahlert T, Schirrmacher V, 1990). Эта разница приводит к тому, что у литических штаммов есть способность продуцировать активированную гемагглютинин-нейроминидазу (ГН) и белок F во внешней оболочке потомков вируса в человеческих клетках. Потомство вирусных частиц, идущее от нелитических штаммов, несет неактивные версии этих молекул. Активные ГН и белок F необходимы ВБН, чтобы попасть в клетку и там копироваться. Первоначальная связь ВБН с клетками хозяина имеет место благодаря взаимодействию ГН молекул в вирусной оболочке с молекулами, содержащими сиаловую кислоту (т.е. ганглиозиды) на поверхности клетки. Очень важно отметить, что, однако, нелитические штаммы ВБН могут оставлять зараженное вирусами потомство в некоторых видах нечеловеческих клеток (пр. клетки куриного эмбриона), что позволяет этим штаммам оставаться в поле зрения (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1987; Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001).

Другой важной разницей между литическими и нелитическими штаммами является то, что хотя оба могут убивать зараженные клетки, механизмы этого действия при достижении результата различны. Выработка зараженного потомства литическими штаммами дает им возможность убивать клетки хозяина очень быстро. Развитие вирусного потомства, которое содержит активные молекулы ГН и белка F во внешних оболочках, заставляет плазматическую мембрану зараженных ВБН клеток сливаться с плазматической мембраной соседних клеток, что ведет к выработке больших нежизнеспоспособных связанных клеток, которых называют синцитий (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000). Литический штамм успевает реплицироваться в хозяйской клетке до того, как это клетку убивает. Более предпочтительное уничтожение раковых клеток литическим штаммом известно как онколизис, а литические штаммы ВН называют онколитическими. Нелитические штаммы ВБН убивают зараженные клетки медленнее, смерть наступает в результате вирусного разрушения в процессе обычного метаболизма хозяйской клетки (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001; Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999).

Как отмечено ранее, и литические, и нелитические штаммы изучались как антираковые агенты. Основные различия между двумя типами штаммов привели к развитию 3х различных направлений в раковой терапии:

заражение пациентов литическим штаммом ВБН;
использование онколицитов, т.е. препаратов, содержащих плазматическую мембрану фрагментов из зараженных ВБН клеток, в качестве противораковой вакцины;
использование раковых клеток, зараженных нелитическим штаммом ВБН как целоклеточную вакцину.

Выявленное преимущество первого направления заключается в том, что вирусная репликация может позволить распространение цитотоксических вирусов к каждой клетке организма (Kirn DH, McCormick F, 1996; Webb HE, Smith CE, 1970), однако выработка антител, нейтрализующих вирус иммунной системой может лимитировать эту возможность (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Kirn DH, McCormick F, 1996; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000). Логическое обоснование второго и третьего направлений в том, что опухолевые специфические антигены (т.е. белки или другие молекулы, которые в основном находятся в плазматической мембране раковых клеток и которые уникальны к раковым клеткам или изобилуют в них) могут лучше распознаваться иммунной системой, если они связаны с вирусными антигенами (т.е. вирусными белками, которые включены в плазматическую мембрану хозяйских клеток) (Kirn DH, McCormick F, 1996; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Webb HE, Smith CE, 1970; Cassel WA, Murray DR, 1992; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990; Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989; DeVita VT Jr, Hellman S, Rosenberg SA, eds., 1997). Если распознавание произойдет, это повышает шансы, что раковые клетки, в независимости заражены они вирусом или нет, будут распознаваться как чужие и уничтожаться (Kirn DH, McCormick F, 1996; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989; DeVita VT Jr, Hellman S, Rosenberg SA, eds., 1997). Первооткрыватели третьего направления настояли, что целоклеточные вакцины могут стимулировать иммунную систему лучше, чем онколициты (Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Ahlert T, Schirrmacher V, 1990; Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Schirrmacher V, 1993). Эти клетки, зараженные нелитическим штаммом ВБН, будут оставаться неповрежденными в организме достаточно долго, чтобы сгенерировать более эффективные иммунные реакции (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001; Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999). Необходимо отметить, что раковые клетки, используемые в третьем направлении, подвергаются действию гамма-излучения, этого достаточно, чтобы предотвратить дальнейшее деление клеток, как до, так и после того, как они заражены нелитическим штаммом ВБН (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993). Эта предосторожность гарантирует, что пациентам не дадут вакцину, которая содержит активно размножающиеся раковые клетки.

И собственные раковые клетки пациента (т.е. аутологичные клетки) и клетки от другого пациента с тем же типом рака (аллогенные клетки) могут использоваться для создания онколицитов и целоклеточной вакцины. Важно отметить, что иммунные реакции схожие с теми, что вызваны онколицитами или вакциной, могут вызываться у пациентов, зараженных литическим штаммом ВБН, и что эти ответы ожидаются, чтобы внести вклад в любой противораковый эффект.

Чтобы провести эксперименты на людях с вирусами, вакцинами или другим биоматериалом в Соединенных Штатах, исследователи должны подать заявление на разработку нового лекарства (РНЛ) совместно с американским министерством питания и фармацевтики. Стандарты безопасности и эффективности для биологического материала и лекарств остаются неизменными с 1972 г. В заявлении на РНЛ исследователи должны предоставить данные по безопасности и токсичности от лабораторных исследований и опытах на животных, чтобы оправдать дозу, ход и список лекарств, которые будут использоваться в предполагаемых клинических опытах. Среди представленных результатов по безопасности, разработчики должны продемонстрировать отсутствие вредных последствий. Большинство опытов на людях по ВБН (по противораковым агентам) проводятся за пределами США, однако, они не требуют РНЛ. В настоящее время, по крайней мере, одна группа американских разработчиков подала заявку на РНЛ по ВБН в качестве противораковой терапии. Необходимо отметить, что министерство питания и лекарств не одобрили использование ВБН для лечения в любом виде.

Штаммы ВБН, которые наиболее широко применяются в лечении, это 73-т, МТН-68 и Ульстер (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR, 1992; Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Csatary LK, 1971; Mallmann P, 1993; Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992; Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Csatary LK, Bakács T, 1999; Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977; Cassel WA, Murray DR, 1988; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995; Proebstle TM, Staib G, Kaufmann R, et al., 1993; Schirrmacher V, 2000; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995). Штамм Т-73 - литический, а Ульстер – нелитический (Nemunaitis J, 1999; Schirrmacher V, 1993; Schirrmacher V, Schlag P, Liebrich W, et al., 1993). Штамм МТН-68 не классифицирован, но предполагается, что он литический (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Csatary LK, Bakács T, 1999). Все три штамма показали малый или неочевидный нейротропизм (т.е. способность реплицироваться эффективно в нормальных нервных клетках или нервной ткани) (Nemunaitis J, 1999; Sinkovics J, Horvath J, 1993; Fábián Z, Töröcsik B, Kiss K, et al., 2001).

В опытах с животными ВБН вводили подкожно (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986), внутримышечно (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986), внутривенно (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001), внутрибрюшинно (Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000) и внутриопухолево (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al., 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986). Зараженные ВБН целоклеточные вакцины давали животным подкожно (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001), внутрибрюшинно (Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994), внутрикожно (Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989) или в комбинации (подкожно и внутримышечно) (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987).

В опытах с людьми ВБН онколициты вводили подкожно (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR, 1992; Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1984; Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990; Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977; Cassel WA, Murray DR, 1988; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995) или внутрикожно (Mallmann P, 1993; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992). Зараженные ВБН целоклеточные вакцины вводились только внутрикожно (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993; Proebstle TM, Staib G, Kaufmann R, et al., 1993; Schirrmacher V, 2000; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995). В тех случаях, когда пациентов заражали литическим штаммом ВБН, использовали внутриопухолевые (Cassel WA, Garrett RE, 1965), внутримышечные (Csatary LK, 1971) и внутривенные инъекции (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Pecora AL, Rizvi N, Cohen GI, et al., 1992; Csatary LK, Bakács T, 1999; Wheelock EF, Dingle JH, 1964), а так же с равным успехом ингаляцию (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993) и прямую инъекцию в толстую кишку (открытая колостомия) (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999). В некоторых вариантах наряду с ВБН терапией использовалось клеточное лечение (Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T:, 1993; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Mallmann P, 1993; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992; Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995).

ВН штамм	Тип штамма	Описание	Предполагаемый механизм действия
73-Т	Литический	Инфекционный вирус	Вирус убивает раковые клетки, стимуляция имм. системы
73-Т	Литический	Онколицит-вакцина	Стимуляция иммунной системы
Ульстер	Нелитический	Инфекционная опухолевая вакцина	Стимуляция иммунной системы
МТН-68	Литический	Инфекционный вирус	(I)
Italien	Литический	Онколицит-вакцина; инфекц. вирус	(I)
Хикман	Литический	Инфекционный вирус	(I)
PV 701	Литический	Инфекционный вирус	(I)

Историческая справка

Первый опубликованный отчет, установивший закономерность между заражением вирусом и регрессией рака, появился в 1912 году (Nelson NJ, 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al, 1993; Nemunaitis J, 1999; Webb HE, Smith CE, 1970; Ahlert T, Schirrmacher V, 1990; Sinkovics J, Horvath J, 1993). В этом обзоре был описан случай с женщиной, чей церквикальный рак уменьшился после соответствующего лечения для предотвращения бешенства. На женщину напала собака, и ей подкожно ввели вакцину, сделанную из ослабленного (угнетенного) вируса бешенства. В последующие 60 лет у многих других вирусов, включая и ВБН, обнаружился противораковый потенциал (Cassel WA, Garrett RE, 1965; Eaton MD, Heller JA, Scala AR, 1973; Wheelock EF, Dingle JH, 1964; Flanagan AD, Love R, Tesar W:, 1955; Sinkovics JG, Howe CD, 1969; Eaton MD, Levinthal JD, Scala AR, 1967). Первый обзор о положительных результатах использования ВБН в качестве лечения человеческого рака был опубликован в 1964 году (Wheelock EF, Dingle JH). Тем временем ослабленные линии ВБН использовались в течение почти двух десятков лет для предотвращения вируса среди птиц, также была установлена неспособность этого вируса вызывать серьезные заболевания у людей.

Как отмечено ранее (в разделе «Общая информация?), клетки, зараженные ВБН, могут быть убиты непосредственно вирусом или косвенно через ответ иммунной системы на инфекцию. Иммунная система использует различные способы, чтобы убить вирусные клетки, включая и атаку цитотоксичными клетками (т.е. естественные клетки-убийцы или цитотоксичные Т клетки); атаку антивирусными антителами, которые состоят из Б клеток; а также освобождение цитокинов (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al, 1993; Sinkovics J, Horvath J, 1993; Kirn DH, McCormick F, 1996; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al, 1992; Sinkovics JG, Horvath JC, 2000; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al, 1996; Cooper NR, Nemerow GR, 1984; Alberts B, Bray D, Lewis J, et al, 1994).

Цитокины могут быть непосредственно токсичны к вирусным клеткам (т.е. опухоленекрозные фактор(Kenney S, Pagano JS, 1994; Kirn DH, McCormick F, 1996; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988), они также могут стимулировать увеличение активности специфического типа клеток иммунной системы (α-интерферон, γ-интерферон и α-TNF) (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al, 1993; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al, 1994; DeVita VT Jr, Hellman S, Rosenberg SA, eds., 1997; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990).

Как также было замечено ранее, если иммунная система отвечает на зараженные вирусом раковые клетки (или фрагмент раковых клеток), то впоследствии будет лучше происходить распознавание специфичных раковых антигенов, а также возрастает способность убивать незараженные раковые клетки (Kirn DH, McCormick F, 1996; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al, 1992; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; DeVita VT Jr, Hellman S, Rosenberg SA, eds., 1997; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR, 1992; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989). Иммунная система предпочитает те же способы убивать незараженные клетки, что и зараженные. Было показано, что α-TNF непосредственно цитотоксичен к некоторым, но не всем, раковым клеткам, в то время как остальные здоровые клетки не повреждаются этим цитокином (Helson L, Green S, Carswell E, et al., 1975; Haranaka K, Satomi N, 1981; Sugarman BJ, Aggarwal BB, Hass PE, et al., 1985; Fransen L, Van der Heyden J, Ruysschaert R, et al., 1986).

Доклинические испытания на животных

Воздействие клеток ВБН на человеческие раковые клетки

Способность ВБН эффективно реплицироваться в человеческих раковых клетках была продемонстрирована как в лабораторных, так и в испытаниях на животных (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al, 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996; Tzadok-David Y, Metzkin-Eizenberg M, Zakay-Rones Z., 1995; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Cassel WA, Garrett RE, 1965; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Ahlert T, Schirrmacher V, 1990). Некоторые из них были проведены с условием, что литические штаммы ВБН также онколициты (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996; Tzadok-David Y, Metzkin-Eizenberg M, Zakay-Rones Z, 1995; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Cassel WA, Garrett RE, 1965; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Ahlert T, Schirrmacher V, 1990).

Штамм 73-Т (литический) убивает следующие виды раковых клеток человека in vitro: фибросаркома, остеосаркома, невробластома, саркома мочевого пузыря, позвоночная саркома, меланома, опухоль Вильна и миелоидная лейкемия (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Cassel WA, Garrett RE, 1965), однако, этот штамм не убивает человеческую лимфому Беркета (Б-клетки) in vitro (Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994). К тому же штамм 73-Т не убивает нормальные человеческие лейкоциты или здоровые фибробласты in vitro (Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994), но уничтожает здоровые легочные фибробласты in vitro при тех же условиях, что и раковые клетки (Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994).

Литический штамм Roakin убивает Б-лимфому и Т-лимфому (лимфома Ходжкина) in vitro на 4-5 минут быстрее, чем он убивает здоровые лейкоциты (Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996; Tzadok-David Y, Metzkin-Eizenberg M, Zakay-Rones Z, 1995). Этот штамм, однако, также убивает здоровые лейкоциты, хотя медленнее, чем раковые клетки (Bar-Eli N, Giloh H, Schlesinger M, et al., 1996).

Italien литический штамм уничтожает клетки легочной карциномы, меланомы, карциномы груди и карциномы гортани, но не церквикальной карциномы in vitro (Ahlert T, Schirrmacher V, 1990). Репликационная эффективность этого штамма в здоровых клетках не тестировалась.

Эти результаты показывают, что существуют несколько видов раковых клеток, в которых литические штаммы ВБН реплицируются не очень хорошо, но также и существуют некоторые виды здоровых клеток, где они реплицируются очень эффективно. Тем не менее, эти данные и отсутствие серьезных побочных эффектов у пациентов, зараженных ВБН, совпадают с мнением, что ВБН реплицируется гораздо лучше в человеческих раковых клетках, чем в других типах здоровых клеток (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al, 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001; Kirn DH, McCormick F, 1996; Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Emergency Preparedness Information eXchange, 2006; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Kenney S, Pagano JS, 1994; Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Moss RW, 1996).

Штамм ВБН Ульстер (нелитический) также эффективно реплицируется в человеческих раковых клетках in vitro, включая и следующие типы опухолей человека: колоректальная карцинома, желудочная карцинома, карцинома поджелудочной, карцинома желудочного пузыря, карцинома груди, карцинома яичников, карцинома почечных клеток, карцинома легких, гортани, позвоночника, глиобластома, меланома, Б-лимфома и Т-лимфома (Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999). Этот штамм не реплицируется очень эффективно в «отдыхающих?, или размножающихся здоровых клетках лейкоцитов in vitro (Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1999). Другие эксперименты показали, что ВБН Ульстер может убивать зараженные клетки (Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999) и может реплицироваться в раковых клетках человека независимо от того размножаются они или нет (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998).

Также была проверена способность литических штаммов ВБН убивать раковые клетки человека in vivo. В экспериментах с ксенотрансплантантом раковые клетки человека вводились как подкожно, так и внутрикожно голым мышам (это те мыши, которые не отторгают опухолевые клетки от других животных, потому что их иммунная система с дефектом), что позволило опухолям формироваться. Затем, ВБН вводили непосредственно в опухоли, после этого проводили мониторинг роста опухолей и % выживающих животных.

Внутриопухолевое введение штамма 73-Т привело к полной регрессии опухолей в 75-100 % случаях у мышей, имевших опухоли человеческой фибросаркомы, нейробластомы или церквикальной карциномы (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al, 1994; Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994; Reichard KW, Lorence RM, Cascino CJ, et al., 1992; Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001). При внутриопухолевом введении штамма 73-Т также происходит более чем 80 % регрессии у 66 % мышей, имевших синовиальные опухоли человека (Lorence RM, Katubig BB, Reichard KW, et al., 1994). К тому же введение 73-Т приводит к угнетению роста опухоли в 68 до 96 % случаях у мышей с эпидермальной карциномой или карциномой легких, груди, простаты или толстой кишки (Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001).

Внутриопухолевое введение штамма Italien приводит к полной регрессии опухоли в 100 % случаях у мышей с меланомой. Однако рост и развитие метастатических опухолей не были затронуты, полагая, что вирус неспособен распространяться по всему организму (Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T, 2001; Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998).

Репликация штамма 73-Т в ранее упомянутых ксенотрансплантантах в нейробрастоме была продемонстрирована увеличением количества вируса, которое можно извлечь из опухолевых образцов (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al., 1994). Но при введении этого штамма в мышцу бедра голых мышей количество вируса, которое можно извлечь, уменьшается со временем (Lorence RM, Reichard KW, Katubig BB, et al., 1994).

В одном эксперименте, мышам с ксенотрансплантантами человеческой нейробластомы однократно ввели внутрибрюшинно штамм 73-Т, и у 9 из 12 (75 %) опытных мышей обнаруживается полная стойкая регрессия (Phuangsab A, Lorence RM, Reichard KW, et al., 2001).

Важно отметить, что голые мыши еще и мало производят Т клеток, они выделяют интерфероны, натуральные убийцы клеток, и макрофаги (Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986; Kadish AS, Doyle AT, Steinhauer EH, et al., 1981; Budzynski W, Radzikowski C, 1994). Возможность, что эти остаточные компоненты иммунной системы, которые могут активироваться присутствием ВБН, вносят свой противоопухолевый эффект, рассмотренный в опытах с ксенотрансплантантами, нельзя рассматривать как правило.

ВБН и иммунотерапия рака

Другие лабораторные и опыты на животных показали, что ВБН и зараженные ВБН раковые клетки могут стимулировать большое разнообразие иммунных ответов, что является неотъемлемой частью успешной иммунотерапии рака (Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990; Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989; Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V, 1988; Schirrmacher V, Schild HJ, Gückel B, et al., 1993). Несколько (но мало) опытов использовали человеческие клетки (Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998), но в большинстве своем были использованы клетки животных (Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990; Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989; Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V, 1988) и опухолевые модели для животных.

Данные от пилотных клинических испытаний 2004 года по ВБН-модифицированной аутологичной опухолевой вакцине на 20 пациентах с 3 и 4 стадиями заболевания головной и шейной чешуйчатой карциномы предполагают, что вакцинная стратегия может стимулировать человеческие противоопухолевые иммунные ответы в манере схожей с той же, что и в моделях на животных и может определенно пролонгировать 5 летний срок выживания в популяции пациентов. Опыты продемонстрировали выполнимость и безопасность вакцинного режима: никаких значительных побочных эффектов не было обнаружено ни у одного из пациентов (Karcher J, Dyckhoff G, Beckhove P, et al., 2004).

Два опыта in vitro показали, что заражение человеческих клеток иммунной системы ВБН вызывает выделение и освобождение цитокинов интерферон-альфа и TNF-альфа (Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988; Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994). В одном из этих опытов (Lorence RM, Rood PA, Kelley KW, 1988) было показано в дальнейшем, что заражение вирусом клеток делает клетки более чувствительными к цитотоксическим эффектам ТNF-альфа.

Дополнительные опыты in vitro показали, что раковые клетки человека, зараженные ВБН, действуют лучше при активации цитотоксических Т клеток, Т-хэлперов и естественных клеток-убийц, чем незараженные человеческие клетки (Zorn U, Dallmann I, Grosse J, et al., 1994; Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1998). Белок ВБН гемагглютинин-нейроминидаза, который присутствует в плазме мембраны клеток, зараженных вирусом, появляется, чтобы сыграть свою роль в усилении активации Т клеток. Очевидно, что этот белок делает зараженные клетки более липкими (адгезионными), таким образом, усиливая взаимодействие между зараженными клетками и иммунной системой (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Haas C, Ertel C, Gerhards R, et al., 1997).

Другие лабораторные исследования показали, что взаимодействие между зараженными клетками и Т клетками может улучшиться, если будут использованы моноклональные антитела, которые связывают гемагглютинин-нейроминидазу на раковых клетках, а также белок СД3 или СД28 на Т клетках (Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998). Было отмечено, что это улучшенное взаимодействие ведет к лучшей активации Т-клеток (Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998). Например, Т клетки (подвергнутые воздействию зараженных ВБН клеток толстой кишки человека и биспецифичные моноклональные антитела показали не только возрастание способности убивать зараженные вирусом клетки, но также и способности задерживать пролиферацию незараженных раковых клеток толстой кишки (Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998). На основе этих и других in vitro изысканий было предположено, что можно провести испытания с вакцинами, содержащими зараженные ВБН раковые клетки и биспецифичные моноклональные антитела, на людях (Schirrmacher V, Ahlert T, Pröbstle T, et al., 1998; Haas C, Herold-Mende C, Gerhards R, et al., 1999; Haas C, Strauss G, Moldenhauer G, et al., 1998; Haas C, Schirrmacher V, 1996; Schirrmacher V, Haas C, 1998).

Как отмечено ранее, клетки животных и животные опухолевые модели также использовались, чтобы открыть потенциал ВБН в иммунотерапии. Esb, мышиная модель метастатической лимфомы Т-клеток, использовалась в большинстве таких работ (Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1998; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V, 1988; Schirrmacher V, Schild HJ, Gückel B, et al., 1993); однако, в дополнительных экспериментах использовали одну или более из следующих опухолевых моделей: мышиная меланома В16 (Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994), мышиная легочная карцинома Льюиса (Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990; Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000), мышиная мастоцитома Р815 (Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000), мышиная карцинома молочных желез 761-Р93 (Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000) и карцинома печени гвинейских свиней (Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989).

В одном опыте было (Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000) показано, что противораковая активность может быть представлена как in vitro, так и in vivo в мышиных макрофагах путем заражения ВБН штаммом Ульстер. Схожая активация мышиных макрофагов in vitro была обнаружена после заражения литическим штаммом La Sota. В этом опыте активированные макрофаги показали цитотоксическую активность против ESb, P815 мастоцитомы и Са 761-Р93 карциномы in vitro. Другие эксперименты продемонстрировали, что большая часть обнаруженной активности может быть отнесена на счет продуцирования и освобождения макрофагов, зараженными TNF-альфа. Дополнительно, активированные макрофаги показали противораковую активность in vivo, когда их вводили в мышиную Са 761-Р93 карциному или карциному Льюиса (Schirrmacher V, Bai L, Umansky V, et al., 2000).

В другом опыте (Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986) внутриопухолевая инъекция штамма Ульстер в растущие ESb опухоли у иммунокомпетентных мышей привела к прекращению роста опухоли и отсутствию метастаз у 42% опытных животных. У оставшихся мышей, рост опухоли и развитие метастаз продолжались на том же уровне, что и у контрольных животных (Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986). Дополнительные результаты этого опыта отметили, что противораковый эффект у животных с ответом привел в первую очередь к активации Т-клеток, направленных против опухолеспецифического антигена в ESb клетках, также как и против вирусного антигена (Schirrmacher V, Ahlert T, Heicappell R, et al., 1986).

Другие опыты со штаммом Ульстер и опухолевой моделью ESb поддерживают идею о том, что вирусные белки проникают в плазматическую мембрану раковых клеток, зараженных ВБН, и могут помочь иммунной системе распознавать опухолевые специфические антигены лучше, что потенциально ведет к увеличению способности убивать незараженные раковые клетки также хорошо, как и клетки, зараженные вирусом (Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V, 1988). По крайней мере, 4 опыта (Schirrmacher V, Jurianz K, Roth C, et al., 1999; Schirrmacher V, Haas C, Bonifer R, et al., 1997; von Hoegen P, Zawatzky R, Schirrmacher V, 1990; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V, 1988) показали, что Т-клетки, выделенные из мышей, в которых ESb опухоли могли быть активированы in vitro сокультурой с зараженными ВБН ESb клетками и что полученные активированные Т-клетки обладают повышенной способностью убивать незараженные ESb клетки in vitro. Еще 2 in vivo опыта (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986) показали, что мыши, котороым делали инъекции с облученными ESb клетками, зараженными ВБН, от 30 до 250 раз более резистентны к последующим инъекциям пролиферативных ESb клеток, чем те мыши, которым первоначально вводили незараженные облученные ESb клетки. Далее, по меньшей мере, 2 in vivo опыта продемонстрировали, что вакцинация мышей облученными ESb клетками, зараженными ВНБ после операции, при которой удаляют первичную растущую ESb опухоль, может предотвратить разрастание метастаз в среднем у 50% опытных животных (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987). После введения впоследствии выжившим мышам пролиферативных ESb клеток, у них не обнаруживалось рака (Heicappell R, Schirrmacher V, von Hoegen P, et al., 1986; Schirrmacher V, Heicappell R, 1987). Похожие результаты можно получить из in vivo опытов, где использовали мышиную В16 меланому (Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994) как модель, а также модель карциномы Льюиса (Shoham J, Hirsch R, Zakay-Rones Z, et al., 1990) и гвинейских свиней (Bier H, Armonat G, Bier J, et al., 1989).

Один фактор, который может повлиять на эффективность ВБН опухолевых вакцин – это итоговый размер опухоли. Результаты, полученные с помощью В16 меланомы, дают возможность предположить, что они менее эффективны в индивидуальных случаях с прогрессирующим метастазным заболеванием (Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994).

Клинические испытания на людях

Противораковый потенциал ВБН был исследован в клинических испытаниях в таких странах как США, Германия и Венгрия. Эти исследования оценили использование онколицитов (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Mallmann P, 1993; Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992; Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977; Cassel WA, Murray DR, 1988; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995), целоклеточных вакцин (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993; Proebstle TM, Staib G, Kaufmann R, et al., 1993; Schirrmacher V, 2000; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995; Stoeck M, Marland-Noske C, Manasterski M, et al., 1993) и заражение пациентов литическим штаммом вируса (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Cassel WA, Garrett RE, 1965; Csatary LK, 1971; Csatary LK, Bakács T, 1999; Wheelock EF, Dingle JH, 1964; Pecora AL, Rizvi N, Cohen GI, et al., 2002). Открытия от большинства исследований, почти все они были в I или во II фазе клинических испытаний, были опубликованы в англоязычных биомедицинских журналах; однако, некоторые результаты (Schirrmacher V, 2000; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995), включая единственные данные (т.е. предварительные изыскания) от случайного клинического эксперимента (Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995), были эксклюзивно опубликованы на немецком языке. Большинство исследований включали в себя небольшое число пациентов и исторические контрольные объекты вернее, чем действительные контрольные группы, часто использовались для исходных сравнений. К тому же оценка многих опытов вызывает затруднения из-за скудных описаний моделей эксперимента и неполных отчетов клинических данных.

Иммунотерапия с онколицитами

Использование онколицитов ВБН на пациентах с метастазной меланомой оценивалось и 4х клинических испытаниях в США (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990; Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977; Cassel WA, Murray DR, 1988). Три из этих испытаний – одно в I фазе (Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977) и два во II фазе клинических испытаний (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Cassel WA, Murray DR, 1988) – были проведены одной и той же группой исследователей. Во всех четырех лпытах для приготовления онколитических вакцин использовался штамм ВБН 73-Т.

В I фазе испытаний (Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977; Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977) 13 пациентам, у которых было прогрессирующее заболевание и традиционная терапия (хирургия, хирургия+химиотерапия и/или облучение) не имела успеха, подкожно вводили раз в неделю онколициты ВБН, приготовленные как из их собственных опухолевых клеток (аутологичные вакцины), так и из культивированных клеточных линий меланомы (аллогенные вакцины). Несколько пациентов получили и традиционную терапию в течение ВБН эксперимента. В образцах крови, взятых в течение эксперимента, зафиксировано увеличение количества Т-клеток и цитотоксической активности лимфоцитов у большинства пациентов (последняя была измерена в соотношении с количеством клеток меланомы in vitro) (Cassel WA, Murras DR, Torbin AH, et al., 1977), но только у одного пациента была полная реакция (Murray DR, Cassel WA, Torbin AH, et al., 1977). Этот пациент, который выжил, и у него не было рака к концу периода исследования (время жизни более 112 недель), получил 6 курсов химиотерапии в течение курса введения онколицитов и у него была последняя прогрессирующая стадия заболевания среди обследованных пациентов. Незначительные ответы были замечены у нескольких пациентов с кожными и лимфоузловыми метастазами, но не было зафиксировано реакций у пациентов с внутренними метастазами.

Как отмечено ранее, исследователи, которые проводили эту I фазу, также провели и две II фазы испытаний. Фаза II испытаний проверяла способность ВБН онколицитов задерживать прогрессирование меланомы от локального рака к общему заболеванию организма (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Cassel WA, Murray DR, 1988). Пациенты в этих испытаниях фазы II перенесли хирургическое вмешательство, вследствие которого был удален первичный рак и радикальные лимфоузлы, так как прощупывались метастазы в региональных лимфоузлах.

В первом испытании фазы II участвовали 32 пациента, 5 из которых предварительно подвергались другим видам иммунотерапии (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, Phillips HS, 1983; Cassel WA, Murray DR, 1988). Меланому нашли от 1 до 3х региональных лимфоузлов у 84% пациентов, от 4 до 5ти региональных лимфоузлов у 9% пациентов, и от 6 до 8ми региональных лимфоузлов у 6% пациентов. Второе испытание фазы II было начало четыре года спустя после начала первого и привлекло еще дополнительно 51 пациента (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, 1988). Среди этих последних пациентов, у 66% была меланома от 1 до 3х региональных лимфоузлов, у 16% меланома была от 4 до 5ти лимфоузлов и у 18% меланома была в 6 и более лимфоузлах (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992; Cassel WA, Murray DR, 1988).

В обоих исследованиях пациентам подкожно вводили ВБН онколициты раз в неделю в течение 4х недель, начиная с 4 по 8 недели после хирургии, потом курс продолжился подкожными инъекциями раз в две недели в течение 1 года после хирургии, далее уколы делали с возрастающим до 3х месяцев интервалом на протяжении 5 лет. В период от 5 до 15 лет после операции некоторым пациентам делали дополнительные уколы онколицитов, интервалы между которыми варьировались от 3х до 6ти месяцев. Четверо пациентов из первого эксперимента получали уколы как аутологичными, так и аллогенными вакцинами, в то время как оставшиеся пациенты из этого исследования и все пациенты второго исследования получали уколы только с аллогенными вакцинами. Через 5 лет после операции 72% пациентов из первого опыта и 63% - из второго были живы, и меланомы не наблюдалось (Cassel WA, Murray DR, 1988). Соответствующее количество выживших для контрольных отчетов, у кого прощупывались региональные лимфоузлы, было около 17 % (данные из научной литературы) (Cassel WA, Murray DR, 1988). Спустя 10 лет после операции количество выживших из первого опыта было 69%, а из второго – 59% (Cassel WA, Murray DR., 1992), для сравнения в количестве выживших от 5% до 15% для исторической справки были прощупываемые региональные узлы или у 33% для исторической справки были не только прощупываемые узлы, но и подтверждение наличия метастаз под микроскопом (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998; Cassel WA, Murray DR., 1992). Через 15 лет после операции общее количество выживших было 59% и 53% в первом и во втором испытании соответственно, с одним выжившим, у которого еще в первом опыте были метастазы (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998). В общем, количество выживших видимо не зависит от количества положительных на рак региональных лимфоузлов, также пациенты, которые получали как аутологичные так и аллогенные вакцины, по-видимому, не чувствовали себя лучше на протяжении эксперимента, чем те, кто получали только аллогенные вакцины (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998).

Четвертое исследование в США по влиянию ВБН онколицитов на пациентов с меланомой также проходило в рамках II фазы клинических испытаний (Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990). В этот опыт, который проводила другая группа ученых, входило 24 пациента, у которых была болезнь, распространившаяся на региональные лимфоузлы. Этих пациентов лечили по сходной схеме с двумя экспериментами фазы II. В этом опыте только у 37% пациентов спустя 5 лет после операции не было заболевания, процент выживших здоровых не сильно отличается от 30% здоровых выживших для исторического контроля, которых лечили в том же учреждении только хирургическим путем или еще добавляли какой-нибудь вид вспомогательной терапии (Plager C, Bowen JM, Fenoglio C, et al., 1990).

В отличие от очевидного успеха, обнаруженного в других опытах фазы II, отсутствие успеха ВБН онколицитов в этом четвертом исследовании еще надо объяснять. Были представлены данные о том, что этими двумя группами ученых были использованы разные методы приготовления онколицитов в этих опытах (Sinkovics J, Horvath J, 1993). Однако, положительные результаты, полученные первой группой исследователей, надо рассматривать с большой осторожностью. До тех пор пока эти результаты не будут подтверждены в более обширных независимых разрозненных исследованиях, они будут считаться предварительными.

Две дополнительных опыта фазы II с ВБН онколицитами были проведены в Германии. В одном было 208 пациентов с локальной прогрессирующей карциномой (т.е. большие опухоли и нет метастаз в региональных лимфоузлах или опухоли любого размера и 1 или 2 региональных лимфоузла положительные на рак) (Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995). Во втором опыте участвовало 22 пациента как с раком груди (метастазный), так и с раком яичников (метастазный) (Mallmann P, 1993; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992).

В исследовании с прогрессирующей карциномой почек (Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995) для изготовления аутологичных онколицитов использовали штамм 73-Т, который вводили пациентам подкожно раз в неделю с 8 по 10 недели, начиная с 1 по 3 месяца после радикальной хирургии (нефректомия и рассечение регионального лимфоузла). Два цитокина, низкодозовый рекомбинатный интерлейкин-2 и рекомбинантный интерферон-альфа, были добавлены в онколитические вакцины. Из 208 пациентов, вошедших в эксперимент, 203 наблюдались на протяжении с 6 до 64 месяцев с момента операции, и эти пациенты были признаны как способные на ответ. В среднем 91% из наблюдаемых пациентов так и остались без заболевания на весь период; а у 9% все-таки проявились признаки прогрессирующей болезни. Среднее время рецидива составляло более чем 21 месяц. У 56 пациентов время наблюдения составляло от 23 до 64 месяцев с момента операции, и в среднем у 18% этих пациентов проявили признаки прогрессирующего заболевания во время наблюдения. Все рецидивы в этой подгруппе из 56 пациентов происходили в течение 34 месяцев после операции.

Исследователи, которые проводили эти эксперименты, пришли к выводам, что результаты продемонстрировали увеличенное количество здоровых выживших для исследовательских отчетов в сравнении с данными о количестве выживших, опубликованных в научной литературе для похожих по заболеванию пациентов, которых только прооперировали (Anton P, Kirchner H, Jonas U, et al., 1996; Kirchner HH, Anton P, Atzpodien J, 1995). Поскольку это исследование было бесконтрольным, то непонятно до конца было ли увеличение количества выживших следствием только хирургии, только лечения онколицитами или цитокинами, или все-таки комбинации онколицитов и интерлейкинов.

Та же группа ученых провела параллельное исследование, в котором иммунная реакция на комбинацию онколицитов и цитокинов определялась на 38 пациентах, у которых была прогрессирующая карцинома почек. В этом параллельном опыте были обнаружены реакции на ВБН-антигены (т.е. продуцирование анти-ВБН-антител) и кратковременное увеличение в крови уровня интерферон-альфа, интерферон-гамма и TNF-альфа, но реакции, по-видимому, важные для эффективного противоракового иммунитета (т.е. продуцирование антигенов увеличивает активность клеток-убийц и увеличивает в крови уровень Т-хэлперов и цитотоксичных Т-клеток) не были обнаружены (Zorn U, Duensing S, Langkopf F, et al., 1997).

Фаза II испытания ВБН онколицитов на пациентах с метастазным раком груди и яичников была описана исследователями как опыт с аутологичными целоклеточными вакцинами (Mallmann P, 1993; Mallmann P, Eis-Hubinger AM, Krebs D, 1992). В этом эксперименте использовался литический штамм Italien, похоже на то, что иммунные реакции у пациентов стимулировались клеточными фрагментами скорее, чем неповрежденными раковыми клетками.

В этом исследовании 22 пациента вакцинировались внутрикожно, по меньшей мере, 3 раза в период с 6 по 8 недели, которые последовали спустя две недели после операции, когда удаляли злокачественные клетки (как первичные опухолевые клетки, так и метастазы). Пациентам также внутривенно вводили циклофосфамид, рекомбинатный интерлейкин-2 и аутологичные лимфоциты, которые стимулировались in vitro интерлейкином-2. Циклофосфамид был назначен для блокировки класса Т-клеток, которые могли угнетать иммунные реакции. В среднем пациенты наблюдались в течение 23 месяцев после операции. У 9 пациентов была полная или частичная иммунная реакция после вакцинотерапии. У 5 пациентов болезнь находилась в стабильном состоянии, а у 8 прогрессировала. В среднем реакция длилась 5 месяцев, но потом опять наблюдалось прогрессирование заболевания. В образцах крови, взятых у пациентов во время лечения, было видно увеличение количества клеток-убийц и рост в плазме концентраций цитокинов интерферон-альфа и TNF-альфа, но эти изменения не были продолжительными. Никаких других иммунных реакций не было зафиксировано. Поскольку эксперимент был бесконтрольным, то неясно можно ли отнести какие-либо из наблюдаемых клинических или иммунных реакций к лечению онколицитами. К тому же, так как использовался литический штамм Italien, то нельзя исключать возможность того, что наблюдаемые опухолевые регрессии, частично, вели к онколизису.

Иммунотерапия целоклеточными вакцинами

Все клинические исследования по целоклеточным вакцинам, зараженным ВБН, о которых было написано в научной литературе, проводились в Германии (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993; Proebstle TM, Staib G, Kaufmann R, et al., 1993; Schirrmacher V, 2000; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995; Stoeck M, Marland-Noske C, Manasterski M, et al., 1993). У большинства пациентов в этих исследованиях был колоректальный рак (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992), рак груди (Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Schirrmacher V, 2000), яичников (Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997; Ahlert T, 1993; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993) или почек (Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Pomer S, Thiele R, Staehler G, et al., 1995). Во всех исследованиях для приготовления аутологичных вакцин использовался нелитический штамм ВНК Ульстер.

Целоклеточные вакцины применялись к пациентам как с локальной так и с метастазной колоректальной карциномой в 1 исследовании фазы I и в двух фазы II клинических испытаний (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996; Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992). Фаза I помогла установить оптимальное количество опухолевых клеток и оптимальное количество вируса, которое надо использовать для среднестатистического пациента, чтобы получить наилучшую возможную иммунную реакцию. Иммунные реакции определялись с помощью кожного теста, в котором измерялась степень ожога и повреждения кожи в местах инъекций. Выборку пациентов, прошедших лечение, сложно определить, так как в обоих научных отчетах были неидентифицированные группы пациентов (Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990). Первый опыт насчитывал 16 пациентов: 2 - со II стадией, 4 – с III стадией и 10 – с IV стадией заболевания (Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990). Во втором было 20 пациентов: 12 - со II стадией, 8 – с III стадией заболевания (Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990). Не ясно, возможно ли, что одни и те же пациенты были описаны дважды в обоих отчетах испытаний. Пациентам с метастатическим заболеванием можно было вступить в эти исследования только в случае, если у них всего одна метастаза.

В исследовании целоклеточные вакцины назначались внутрикожно, начиная с 4й недели после операции, когда им удаляли первичную или метастазную опухоль. Каждый пациент, в общем, прошел 5 вакцинаций, 4 были сделаны с 10ти-дневным интервалом, а последний бустер был сделан спустя 23 недели после операции. Один из исследовательских отчетов (Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990) утверждает, что у 75% (12 из 16 пациентов) пациентов было увеличение реакционной способности против аутологичных незараженных опухолевых клеток в течение программы вакцинации. Эти реакции определялись путем введения незараженных облученных опухолевых клеток в кожу и наблюдением за реакцией гиперчувствительности отложенного типа. Гистологического обследование нескольких мест вакцинации в течение исследования показало присутствие просочившихся клеток иммунной системы. Эти клетки первоначально состояли из Т-хэлперов, некоторые виды цитотоксических Т-клеток также присутствовали, но В-клетки (клетки, продуцирующие антитела) либо отсутствовали, либо были очень редки (Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990).

Два исследования фазы II искали очевидность терапевтического эффекта у пациентов, как с локальной (Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996), так и с метастатической колоректальной карциномой (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992). Исследование с пациентами с метастатическим заболеванием набрало 23 добровольца, у которых колоректальный рак вернулся в печень или те, у которых колоректальные метастазы и метастазы в печени диагностировались в одно время (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992). После операции, во время которой были удалены первичная опухоль и/или метастазы, у всех пациентов было зафиксировано отсутствие резидуального рака. Аутологичные опухолевые клетки, зараженные ВБН, были назначены внутрикожно каждые две недели, начиная со второй недели после операции. Однако общее число вакцинаций, проведенных пациентам в этом опыте, неизвестно. Один их двух исследовательских отчетов отмечает, что каждый пациент прошел 4 вакцинации и получил бустер спустя 23 недели после операции (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991). Второй отчет сообщает (Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992), что было 5 вакцинаций и бустер. Никакого дополнительного лечения в течение исследований (химиотерапия или облучение) не было применено.

В течение 18 месяцев наблюдения у 14 пациентов (61%) в этом исследовании были рецидивы их заболевания; для сравнения у 23 объектов исторического контроля, которых подвергли только операции те же хирурги в том же госпитале, у 20 пациентов (87%) были рецидивы. Хотя это различие является статистически значимым в количестве людей, свободных от заболевания, оно не является таковым для общего числа выживших пациентов между объектами исследования и историческим контролем. Исследователи также докладывали, что, в общем, те пациенты, у которых была самая сильная иммунная реакция на незараженные аутологичные опухолевые клетки после вакцинации, имели и самый длительный период времени без заболевания. Надо также отметить, что отчеты о реакциях на незараженные аутологичные опухолевые клетки в этом исследовании противоречивы (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991; Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992). Один исследовательский отчет (Liebrich W, Schlag P, Manasterski M, et al., 1991)описывает результаты после 12 месяцев наблюдения, в нем отмечено, что 11 из 23 пациентов показали увеличение реактивности иммунной системы на незараженные аутологичные опухолевые клетки во время программы вакцинации; в то время как в другом отчете (Schlag P, Manasterski M, Gerneth T, et al., 1992), который описывает результаты после 18 месяцев наблюдения, отмечено, что только у 9 из 23 пациентов было такое увеличение реактивности.

В фазе II испытаний участвовало 57 добровольцев, это были пациенты с локальной прогрессирующей колоректальной карциномой (т.е. большие опухоли без метастаз в региональных лимфоузлах или опухоли разного размера и региональные лимфоузлы позитивные на рак) (Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996). Из этих 57 пациентов, 48ми были сделаны инъекции целоклеточными вакцинами, зараженными ВБН, а 9 – вакцинами, состоящие из аутологичных опухолевых клеток и бактерий БКГ, которые также применяются как иммуностимулятор. Пациенты, которые участвовали в этом исследовании, сначала были прооперированы, а затем им на выбор были предложены химиотерапия или участие в исследовании. Пациентам, которые выбрали участие в исследовании, вводили внутривенно соответствующие аутологичные опухолевые вакцины раз в 2 недели в течение 6 недель (т.е. по три вакцинации на пациента), начиная с 6й по 8ю неделю после операции. Период наблюдения варьировался от 6ти до 43х месяцев (в среднем 22 месяца), количество выживших без заболевания и общее количество выживших рассчитывалось как для вакцинированных, так и для 661 пациента исторического контроля, которых только прооперировали. Через 2 года после операции общее количество выживших пациентов, которых лечили аутологичными целоклеточными вакцинами, зараженными ВБН, составляло 98%, у тех кого лечили БКГ вакциной – 67%, а с исторического контроля – 74%. Эта разница между группами между группами является статистически значимой. Количество выживших без заболевания в первой группе составило 72%. Исследователи, проводившие испытания, докладывали, что общее количество выживших пациентов несущественно отличается от той группы, которая выбрала химиотерапию вместо иммунотериапии (Ockert D, Schirrmacher V, Beck N, et al., 1996).

Два доклинических исследования фазы II изучали действие аутологичных вакцин, зараженных ВБН, на пациентах с раком яичников или почек (Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995; Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993). В опыт с раком яичников вошло 82 пациента, но только у 39 были замечены иммунные реакции (Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993). Однако в опубликованном отчете по этому исследованию были описаны результаты только 24 пациентов с реакцией, у которых была III стадия заболевания; результаты же остальных пациентов ( 5 – с I стадией, 5 – со II стадией и 5 - с III стадией) не присутствовали. Пациентов в этом исследовании сначала прооперировали, потом провели 6 курсов химиотерапии, в дополнение было назначено три курса иммунотерапии внутрикожно, но детально не описано, что за дополнительные средства были использованы (т.е. что был за курс иммунотерапии или что за лекарства использовались в курсе химиотерапии дополнительно к цисплатину). Среди описанных 24х «реактивных? пациентов из отчета у 15 была полная ремиссия, у 8 – частичная, а у одного пациента было прогрессирующее заболевание. Среднее время жизни пациентов без следов болезни, из тех, у кого была полная реакция, составляло 30 месяцев. Эти результаты были описаны как очень обнадеживающие тех ученых, которые проводили эти испытания, но степень успеха, достигнутая иммунотерапией в этом бесконтрольном опыте, не может быть основополагающей. Общее у этого опыта с другими, использующими опухолевые вакцины, зараженные ВБН, то, что при гистологическом исследовании мест вакцинации было обнаружено присутствие инфильтратов, состоящих из Т-хэлперов (Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993).

Испытания фазы II с аутологичными опухолевыми вакцинами, зараженными ВБН, на пациентах с раком почек проходили на 40 добровольцах, у которых болезнь распространилась с почки хотя бы на один другой орган (Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995). Пациентов в этом исследовании сначала прооперировали (радикальная нефректомия), чтобы удалить первичную опухоль, а затем внутрикожно вводили опухолевые клетки, зараженные ВБН, на протяжении 3 и 5 недель после операции. Пациентам также вводили низкодозовый рекомбинатный интерлейкин-2 и рекомбинатный интерферон-альфа. У 5 пациентов была полная реакция, а у 6ти – частичная. После 4х лет наблюдения общее количество выживших из этих 11 пациентов было 100%. Из оставшихся 29 пациентов у 12ти было стабильное состояние (среднее время жизни 31 месяц), а у 17ти – прогрессирующее заболевание (среднее время жизни 14 месяцев). Также исследователи сообщили, что среднее время жизни 36 объектов исторического контроля составляло 13 месяцев, их оперировали и подвергали другим видам дополнительной терапии (химиотерапия, облучение или гормональная терапия). Общий процент пациентов, как с полной, так и с частичной реакцией (т.е. 28%) в этом бесконтрольном опыте схож с тем количеством в других исследованиях, где такие же пациенты подвергались терапии цитокинами, но не вакциноровались (Pomer S, Schirrmacher V, Thiele R, et al., 1995). Поэтому неясно, можно ли любой видимый клинический успех в этом эксперименте отнести к вакцинации опухолевыми клетками, зараженными ВБН.

В пятом эксперименте фазы II клинических испытаний тестировали вакцины, зараженные ВБН, на 43 пациентах, у которых были различные виды рака (16 – яичники, 22 – грудь, 1 – церквикальный, 1 – вагинальный, 1 – легкое и 1- хондросаркома), которые не имели реакции на предыдущее лечение (Ahlert T., 1993). Пациенты в этом опыте получали внутривенные инъекции циклофосфамида и эпирубицина, подкожные инъекции низкодозового рекомбинатного интрерлейкина-2 и интерферон-альфа и внутрикожные инъекции опухолевых клеточных вакцин. Циклофосфамид и эпирубицин назначалисб, чтобы блокировать активность подавляющих Т-клеток, которые могли угнетать желательные иммунные реакции. Исследовательский отчет не представил никакой информации о безуспешном лечении, проведенном ранее, о временных интервалах, которые были между последним лечением и началом иммунотерапии, а также какое количество вакцинаций прошел каждый пациент. Среди оцениваемых пациентов у одного с раком яичников была полная реакция, которая длилась более 2х месяцев. У оставшихся наблюдаемых были также частичные реакции (11 человек), стабильные состояния (10 человек) или прогрессирующее заболевание (9 человек) после лечения. В виду крайней скудности предоставленной информации, никаких выводов из этого бесконтрольного опыта нельзя сделать по поводу эффективности вакцин, зараженных ВБН, в данной группе пациентов.

Еще в одном дополнительном исследовании оценивали эффект от вакцин на выживших пациентах, которых до этого лечили аутологичными опухолевыми клетками, зараженными ВБН (Ahlert T, Sauerbrei W, Bastert G, et al., 1997). В этом ретроспективном опыте число выживших определялось отдельно в трех группах: у кого ранний рак груди (63 человека), метастазный рак груди (27 человек) и метастазный рак яичников (31 человек); у них у всех было достаточное количество возвращающихся опухолей, что позволило провести, по крайней мере, две вакцинации. Большинство пациентов, у которых был рак груди на ранней стадии, прошли помимо вакцинации и разные виды традиционной терапии (химиотерапия, облучение и/или гормоны) после операции. Пациенты, у которых был метастатический рак груди или яичников, не имели успеха при методах традиционной терапии. В дополнении к опухолевым вакцинам этим пациентам еще давали перорально индометацин и циметидин, внутривенно циклофосфамид и эпирубицин, и подкожно рекомбинантный интерлейкин-2 и α-интерферон. Индометацин, циметидин, циклофосфамид и эпирубицин вводились в попытки предотвратить угнетение иммунных реакций. Аутологичные вакцины классифицировались как высококачественные и низкокачественные на основе двух параметров: уровень опухолевых клеток по отношению к другим клеткам и % живых опухолевых клеток. Среднее время начала иммунотерапии после операции составляло 23, 27 и 28 дней для пациентов с ранним раком груди, метастазным раком груди и яичников соответственно.

Спустя 4 года после операции количество выживших пациентов с ранним раком груди, получавших высококачественные вакцины, составляло 96 % (n=32), а низкокачественные – 68 % (n=31). Для пациентов с метастазным раком груди среднее время выживания составило 1,75 года после иммунотерапии, кто получал высококачественные вакцины (n=13), а низкокачественные - 0,75 года (n=14) (среднее время наблюдения-1,4 года). Для пациентов с метастазным раком яичников среднее время жизни после получения высококачественных вакцин было 1,16 года после начала иммунотерапии (n=18), а низкокачественных – 0,84 года (n=13) (среднее время наблюдения -1,23 года). Только у единственного пациента с ранним раком груди был статистически значимый результат. Главными недостатками этого исследования являются давность проведения и небольшое количество пациентов.

В этих двух ранее упомянутых исследованиях, при фазе I колоректального исследования (Bohle W, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990; Lehner B, Schlag P, Liebrich W, et al., 1990) и фазе II рака яичников (Möbus V, Horn S, Stöck M, et al., 1993), при гистологическом исследовании нескольких мест вакцинации были обнаружены инфильтрационные клетки иммунной системы. Однако эти клетки, прежде всего, состоят из Т-хэлперов (CD4+), цитотоксические Т клетки (CD8+) также присутствовали, но только как второстепенный компонент. В другом исследовании (Stoeck M, Marland-Noske C, Manasterski M, et al., 1993) в местах вакцинации, в срезах, у 5 пациентов (2 – с толстой кишкой¸ 2 – с меланомой и 1 – с яичниками) также нашли инфильтраты, состоящие в основном из Т-хэлперов. В действительности CD8 клетки было невозможно определить в культуре лимфоцитов из мест вакцинации у 2х из 5ти этих пациентов (Stoeck M, Marland-Noske C, Manasterski M, et al., 1993). Наличие небольшого количества цитотоксических Т клеток в местах вакцинации является важным фактором, чтобы можно было принимать решение при оценке результатов исследований целоклеточных вакцин, так как исследования, как на людях (Batliwalla FM, Bateman BA, Serrano D, et al., 1998), так и на животных показали (Plaksin D, Porgador A, Vadai E, et al., 1994; Von Hoegen P, Weber E, Schirrmacher V., 1988; Schirrmacher V, Schild HJ, Gückel B, et al., 1993; Bosslet K, Schirrmacher V, Shantz G, 1979), что этот класс Т-клеток необходим для эффективного, долгого противоракового иммунитета. Также необходимо отметить, что в другом исследовании (Patel BT, Lutz MB, Schlag P, et al., 1992) у 2х пациентов с колоректальным раком было зафиксировано увеличение активности клеток-убийц в образцах крови, у которых обнаружили отложенный тип гиперчувствительности в местах вакцинации, но не были обнаружены цитотоксические клетки против опухолевоспецифических антигенов. В общем, эти результаты отмечают, что зараженные ВБН аутологичные целоклеточные вакцины возможно вносят свой вклад в стимуляцию активности клеток-убийц, которая повлияла на клинические (результаты) испытания, описанные выше, но также эти вакцины могут быть малодейственными в содействии по крайней мере одной дополнительной иммунной реакции (продуцирование цитотоксических Т клеток-мишеней), которая важна возможно для установления длительного противоракового иммунитета. Но пока еще необходимо доказать, что включение биспецифических моноклональных антител в целоклеточные вакцины делает их эффективнее.

Заражение пациентов Вирусом НьюКасла (включая штамм МТН-68)

Научные изыскания в области лечения рака человека с использованием заражения пациентов ВБН проводились в Венгрии (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993; Csatary LK., 1971; Csatary LK, Bakács T., 1999). Венгерский эксперимент проводился единственной группой ученых, которые пропагандировали использование литического штамма ВБН МТН-68. Результаты этих исследований были опубликованы в форме небольшого отчета, где кратко описывались результаты трех пациентов, у которых была метастазная стадия заболевания (Csatary LK., 1971); единственный случай у ребенка с мультиформой глиобластомы (Csatary LK, Bakács T., 1999) отчет о маленьких сериях, которые включали 4х пациентов с прогрессирующей стадией рака (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999); и отчет о II фазе клинического испытания, где участвовала 33 пациента в группе с лечением ВБН и 26 человек, которым вводили безвредное лекарство (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993). У пациентов фазы II испытания были различные виды прогрессирующего рака (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993). По мнению исследователей МТН-68 в качестве лечения имел бы положительный эффект для большинства этих пациентов.

У пяти пациентов, описанных в отчете и небольших сериях, произошла полная или частичная ремиссия после ВБН терапии (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999; Csatary LK, Bakács T., 1999). У двоих пациентов в конкретных сериях был прогрессирующий колоректальный рак, у одного – меланома и у 4х – прогрессирующая болезнь Ходкина (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999). Эти 5 пациентов подверглись лечению ВБН ежедневно в течение периодов времени, которые варьировались от 1 месяца до 7 лет. Ингаляция и внутривенные инъекции были основными способами введения вируса. Тем не менее, один пациент с колоректальным раком получал инъекции в толстую кишку (открытая колостомия) на протяжении 4х недель. Необходимо отметить, что перед ВБН терапией все 5 пациентов подверглись традиционной терапии, и что 4 из 5 получали традиционную терапию конкурентно с ВБН терапией или после нее. Небольшое количество пациентов, отсутствие группы контроля, а также перекрывание различных видов терапии вот то, что затрудняет сделать выводы по поводу эффективности ВБН терапии в этих небольших исследованиях.

В фазе II испытания (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993) ВБН вводился ингаляционно только 2 раза в неделю в течение 6 месяцев. У 33 пациентов опытной группы были следующие виды рака: колоректальный (n=3), желудка (n=6), почек (n=3), поджелудочной (n=3), легких (n=1), груди (n=1), яичников (n=1), кожи (n=1), желчного протока (n=1), желчного пузыря (n=1), костей (n=1) и эпендимомы (n=1). Распределение группы видов рака среди 26 пациентов контрольной группы таково: колоректальный (n=5), желудка (n=3), почек (n=6), легкого (n=1), груди (n=1), кожи (n=1), желчного протока (n=1), костей (n=1) и пузыря (n=1). У 24 пациентов опытной группы (73 %) были удаленные метастазы, когда они присоединились к испытаниям, а в контрольной группе – у 22 пациентов (85 %). 31 пациент (94 %) опытной группы прошел один из видов традиционной терапии (хирургия, химиотерапия, облучение); 9 из них (29 %) прошли более одного вида терапии. Все пациенты (100 %) контрольной группы прошли традиционную терапию перед введением вируса; 15 из них (58 %) прошли несколько видов традиционной терапии. Средний возраст пациентов опытной группы составлял 62,6 года, а в контрольной – 55,4 лет. Обе группы были хорошо сбалансированы по половому признаку (61 % - мужчины и 39 % - женщины в обеих группах) и по состоянию здоровья (1,39 для каждой группы; исходя из того, что 0=без жалоб; 1=способен к легкой работе; 2=менее 50 % времени в кровати; 3=более 50 % времени в кровати; 4=100 % постельный режим). Две полные реакции и 6 частичных было получено в опытной группе, в то время как в контроле ни одной. У 10 пациентов из опытной группы заболевание стабилизировалось, а в контрольной только у 2х. Более того, у большего числа пациентов из опытной группы, чем в контроле, обнаружились существенные улучшения в качестве жизни. 24 пациента (67 %) из опытной группы прожили, по крайней мере, 1 год, а в контроле столько же прожило всего 4 (15 %) пациента. 2 года прожили 21 % и % пациентов из опыта и контроля соответственно.

Эта фаза II испытаний имела ряд недостатков, которые могли повлиять на ее результаты. Самый важный недостаток заключался в том, что пациентов не разделили на две группы в произвольном порядке. Отсутствие случайности повышает возможность систематической ошибки. В этом отношении, необходимо отметить, что большее число пациентов в опытной группе, чем в контрольной, подверглись традиционной терапии в течение 3х месяцев предварительно перед началом ВБН терапии (82% в опыте и 58% в контроле) (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993). В действительности средний промежуток времени между завершением традиционной терапией и началом вирусотерапии среди пациентов, у которых была как полная, так и частичная реакция, составлял 1,8 месяца (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I, et al., 1993). Поэтому трудно определить вклад вирусотерапии в данные клинические результаты.

В фазе I испытаний, которые проводились в США, был протестирован другой литический штамм ВБН, PV701, на пациентах с различными прогрессирующими видами рака (Pecora AL, Rizvi N, Cohen GI, et al., 2002). В этом исследовании 79 пациентам с опухолями, которые не поддались традиционным видам терапии, внутривенно вводили инъекции вируса. Оценивали четыре различных схемы лечения:

Одинаковая по концентрации доза ВБН вводится каждые 28 дней (17 пациентов).
Одинаковые дозы ВБН вводились 3 раза в течение недели; повторение через каждые 28 дней (13 пациентов).
Три инъекции ВБН в течение недели, но первый укол содержал более низкую дозу ВБН, чем остальные два; повторение через 28 дней (37 пациентов).
Шесть инъекций ВБН в течение 2х недель, с учетом того, что первый укол содержал более низкую дозу ВБН, чем остальные пять; повторение через 21 день (12 пациентов).

Исследователи обнаружили, что использование более низких концентраций вируса в начале позволяет потом назначать более высокие дозы. Полная реакция была только у одного пациента, а частичная регрессия опухоли была отмечена у 8. У 13 пациентов заболевание стабилизировалось на период времени от 4х до 30ти месяцев. Пять пациентов умерли во время исследования: четыре по причине прогрессирования заболевания, а один, возможно, от осложнений. У некоторых пациентов были ярковыраженные неблагоприятные побочные явления от лечения ВБН, такие как лихорадка, повышенная утомляемость, обезвоживание, низкое давление, затруднение дыхания и гипоксия. Некоторым пациентам с данными побочными эффектами потребовалась госпитализация. Исследователи отмечали, что в скором времени будут проводиться дополнительные клинические испытания.

Главное заключение, которое можно сделать по поводу эффективности лечения раковых больных путем повторного назначения литического штамма ВБН, это то, что иммунная система начинает вырабатывать нейтрализующие вирус антитела. Эти антитела не позволяют вирусу достичь и заразить злокачественные клетки, но и также блокирует онколизис. Ослабление вирусного заражения также лимитирует способность лимфоцитов, которые направлены против вирусных антигенов, убивать зараженные вирусом раковые клетки. Также лимитирование заражения раковых клеток отразиться на вероятности того, что иммунная система будет учиться лучше распознавать опухолевоспецивичные антигены. Венгерские исследователи показали, что анти-ВБН-антитела вырабатываются у пациентов, которые прошли терапию МТН-68 (Csatary LK, Moss RW, Beuth J, et al., 1999), но они не определили точно, являются ли эти антитела нейтрализующими вирус. Однако при последнем обследовании, при котором толерантность иммунной системы стимулировали повторным назначением вирусотерапии, было высказано мнение, что нельзя считать действие вирусонейтрализующих антител полностью гарантированным (Ilan Y, Sauter B, Chowdhury NR, et al., 1998; Ilan Y, Chowdhury JR, 1999). Вероятно, что частые ингаляции или инъекции ВБН могут привести к иммунитету к данному вирусу. Эта возможность будет исследована в дальнейших работах.

Предлагаемый проект скрининга рака молочной железы включает использование современных высокоэффективных технологий с целью выявления заболевания на доклинической стадии с учетом наличия многообразия факторов риска рака молочной железы

Вернуться в "Публикации"

Публикации